首先要明白，marker和内参不是一种东西。Marker是用来标定蛋白或者DNA大小的。内参对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
内参一般是指待测样品中含有的一个表达水平稳定的蛋白质，而不是与待测样品相区分的另外一种样品。楼主所说的内参是否与其他的什么概念混淆了？如果给更具体的信息，我可以继续
在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞 中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
封闭。5%牛奶封闭了一会儿，直接扔冰箱里了。因为已经体力不支了，所以电脑也没带回去。在这期间我把病理切片的名单写在了载玻片上面，算是弥补了一点原本当天要完成的工作。今天，早早地过去，就是希望把westernblot的流程完成了。洗膜。1X TBST洗膜，这个我已经提前配置好了，没有压力。
蛋白Marker：预染或非预染各种分子量的蛋白，用于标示电泳中蛋白的大小和示踪 内参对照：管家基因编码的、很多组织和细胞中都稳定表达的蛋白，用于检测整个WB实验过程及体系是否正常工作，并作为半定量检测目的蛋白表达量的标准对照。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。
如果你的材料--芍药没有发表过内参基因的话，就得自己筛选了，这样就比较麻烦，首先就是要确定内参基因在你的比较组的各种情况下表达是稳定的。建议你再多查查文献，特别是国外的文献，已有发表的概率还是很大的。
最简单的方法就是从别人文献中查，看看有没有学者已经在文献中公布内参序列了，实在找不到可以给文献作者发邮件询问、索要。
dna定量检测内参步骤如下：选择合适的内参：根据实验的需要和研究对象，选择一个在待测DNA样本中普遍存在且稳定的基因片段作为内参。内参应具有稳定的表达水平，以确保测量结果的准确性和一致性。设计内参引物：根据选择的内参基因片段，在该片段上设计引物。
做定量PCR的话，一般不会在一个样品中加入两对引物，内参和你的目的基因都是分别进行反应的。比如说你有3个样品，每个样品需要测定目的基因A，B和内参，那就做3*3*3=27个孔就好了，3个样品，每个样品测三个基因，每一个基因做3个重复取平均。
可以去文献里找，一般GAPDH和bate-actin用的比较多。
可以换一个。其实很多药物影响糖代谢，会改变GAPDH。建议试试PPIA（肽基脯氨酸异构酶），它与蛋白质表达有关，含量比较稳定，除静息细胞外基本不变。
不恒定。GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的，所以可以认为GAPDH表达是恒定的，能够可以选择它来做内参，只有不恒定的情况下才不会选择做，这样会导致GAPDH的表达量会增多。
影响PCR的因素很多，3个重复间有差异是很正常的，因为人不可能做得条件完全一致，但是同样3个重复有扩出来的，那说明你的引物是没有问题的，那就要看你加样是如何加的了。一般都是用mix做，只需加入引物和模板。
这个概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要检测某个基因的表达，降低或者提高，但是当你得出结果以后，你并不知道是它本身的表达降低/提高了，还是你操作过程中造成的误差（比如提RNA时的损失），所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照。
内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了 管家基因是用来定量的。
荧光定量 PCR 在RNA相对定量分析中扮演关键角色，内参基因的选择至关重要。它作为内部参照，帮助校正实验误差，确保结果的准确性。内参基因如GAPDH、β-actin等，在不同组织和细胞中表达相对恒定，用于纠正样本处理误差。内参基因的重要性在于，没有它，我们无法准确计算样本间的表达差异。